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水稻成熟种子直链淀粉含量的测定实验

来源:www.zhibao17.com 更新时间:2012-09-10 阅览2267次

水稻成熟种子中直链淀粉含量(AC)的测定
1.1 样品前处理
    以株为单位混收部分种子。从每一单株上所结的成熟种子中选取 50 粒左右,一部分用于测定糊化温度,一部分合后磨成精米粉,按部颁标准 NY147-88 所示方法用于直链淀粉分析仪测定直链淀粉含量。
1.2 大量测定
    种子成熟后,按单株收获。直链淀粉含量的测定按农业部部颁标准 NY147-88进行。在万分之一天平上准确称取 50mg 干精米粉,装入 50ml 带刻度试管中;然后在试管中加入 0.5ml 无水乙醇,轻摇试管使样品湿润分散, 再加入 4.5ml 1.0mol/l的 NaOH 溶液,混匀;将试管置沸水浴中煮 20min,冷却至室温后用蒸馏水定容至刻度,充分混匀;汲取 5ml 消化液,加入已盛有 20ml 左右蒸馏水的 100ml 容量瓶中;加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液,使样品酸化;加入 1.5ml 0.02% 的碘液,用蒸馏水定容至刻度,摇匀后放置 15 min;在分光光度计上于 620nm 波长下用 1cm比色杯测定光密度值;最后以标准样品测得的光密度值及其相应的直链淀粉含量制作标准曲线,并根据此计算待测样品的直链淀粉含量。每一样品做 2 重复。
1.3 单粒测定
    取精米研磨成粉并过 100 目筛,再烘干。准确称取 5~10mg 干精米粉,装入50ml 带刻度试管中;然后在试管中加入 0.2ml 无水乙醇,轻摇试管使样品湿润分散, 再加入 0.9ml 1.0mol/l 的 NaOH 溶液,混匀;将试管置沸水浴中煮 20min,冷却至室温后用蒸馏水定溶至刻度,充分混匀;汲取 25ml 消化液,加入已盛有 20ml左右蒸馏水的 100ml 容量瓶中;加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液,使样品酸化;加入 1.5ml 0.02% 的碘液,用蒸馏水定容至刻度,摇匀后放置 15 min;在分光光度计上于 620nm 波长下用 1cm 比色杯测定光密度值;最后以标准样品测得的光密22度值及其相应的直链淀粉含量制作标准曲线,并根据此计算待测样品的直链淀粉含量。

水稻成熟种子中胶稠度和糊化温度的测定
     以株为单位混收部分种子。从每一单株上所结的成熟种子中选取 50 粒左右,一部分用于测定糊化温度,一部分混合后磨成精米粉,按部颁标准 NY147-88 所示方法用于测定直链淀粉含量和胶稠度。
2.1水稻成熟种子淀粉粘滞性谱(RVA)分析采用澳大利亚Newport Scientific 仪器企业生产的3-D型RVA仪进行快速测定,用 TCW(thermal cycle for windows)配套App进行分析。根据操作规程,含水量为14.0%时,样品量为 3.00g,蒸馏水 25.0ml。在搅拌过程中,罐内温度变化如下:50℃下保持1min;以12℃/ min的速度上升到95℃(3.75min);95℃下保持2.5 min;以 12℃/ min 下降到 50℃(3.75min);50℃下保持 1.4min。搅拌器在起始 10s 内转动速度为 960r/min,之后保持在 160r/min。粘滞性值用 RVU(RVA 粘度单位)表示。RVA 谱特征除用峰值粘度(peak viscosity)、热浆粘度(hot viscosity)和冷胶粘度(cool viscosity)描述外,还用崩解值(breakdown, 峰值粘度-热浆粘度)、消减值(setback, 冷胶粘度-峰值粘度)和回复值(consistence, 冷胶粘度-热浆粘度)等来表示(AACC,1995)。
2.2 稻米籽粒扫描电镜观察成熟期选择部分转基因系及其对照,按单株选择相同熟期的整个单穗,自然晒干。从各个单穗上取相似生长位置的强势粒。于 Philips XL 30-ESEM(环镜扫描电子显微镜)环扫下观察籽粒横向的自然断裂面的淀粉充实情况。
2.3 田间性状调查按完全随机区组设计,种植转基因纯合体及未转化对照,2 次重复,分小区种植,每行 15 株,每列 8 株。每个小区随机取 10 株考察主要农艺性状,考察内容包括:株高、穗长、单株分蘖数、结实率和千粒重,进行统计分析,比较转基因纯合体主要农艺性状与未转化对照的差异。

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